香鱼幼鱼、成鱼各阶段脂肪腔道的组织结构观察【开题报告+文献综述+毕业设计】 23页

本科毕业论文系列开题报告水产养殖香鱼幼鱼、成鱼各阶段脂肪腔道的组织结构观察一、选题的背景与意义香鱼（Plecoglossusaltivelis)属鲑形目，香鱼科，香鱼属。辽东半岛俗称秋生鱼，日本俗称鲇鱼，还有年鱼、油香鱼等称号。它肉质鲜美,清香无腥，被称为“淡水鱼之王”，具有很大的营养价值，含人体所需的多种氨基酸，再加上口味上佳，所以深受消费者欢迎,其经济价值很高。香鱼具有很大的发展潜力，一些像宁波这样适宜香鱼养殖的地方，可以预见不久的将来，发展香鱼会成为一大热点。而由于它能散发出浓郁的芳香是因为它的背脊上长有一条满是香脂的腔道，所以开展对香鱼脂肪腔道的研究，也具有很大的经济价值。同时，研究香鱼的脂肪腔道对于进一步了解其生物学特征、改善人工养殖香鱼口味和品种改良等方面有很大的帮助。目前国内外的研究涉及香鱼脂肪腔道的不多，具有创新性和开拓性，根据其他关于组织结构观察的实验，可以通过石蜡切片法观察腔道的结构，了解细胞形状与排列，以及上皮组织与结缔组织等的具体构造，分析与功能存在某种适应性关系的结构，并通过提取不同生长发育阶段的幼鱼、成鱼的脂肪腔道来掌握随着香鱼的生长，其腔道结构的变化，从而了解其生物学特征。总之，随着人们越来越重视对于香鱼的研究，这种实验更是具有重大的意义。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：研究基本内容：1.幼鱼、成鱼各阶段脂肪腔道的组织结构观察。拟解决的主要问题：1.样品石蜡切片观察结构三、研究的方法与技术路线：（一）研究的方法:1.试验样品：本实验所用香鱼养殖在浙江宁海的香鱼养殖场，于不同时间获取幼鱼期和成鱼期香鱼的脂肪腔道。香鱼仔鱼，即卵黄囊逐渐完全消失，由内源营养转向外源营养时的香鱼个体，到稚鱼，从背鳍开始发育至鳞片齐全，体色转黑，再到 发育为具有成年鱼形状特征，鱼体色转黑至性发育成熟前的幼鱼；成鱼期指性腺发育成熟。2.石蜡切片制作：利用石蜡渗透固化组织，碱性染料如苏木精、碱性品红等，会使细胞核着色，酸性染料如伊红、酸性品红等，会使细胞中的嗜酸性成分，如蛋白质着色。大致过程是取材-固定-漂洗-脱水-透明-透蜡-包埋-修块-切片-染色。3.不同阶段香鱼切片观察分析：分别不同阶段的幼鱼、成鱼的脂肪腔道制成石蜡切片，通过光镜观察拍照，了解组织中细胞的形状与排列，并通过提取不同生长发育阶段的香鱼的脂肪腔道来掌握随着香鱼的生长，其腔道结构的变化，从而了解其生物学特征。4.主要仪器与试剂：常用解剖器材(解剖刀、剪和尖头镊子等)、电子天平/直尺、载玻片、盖玻片、刀片、切片机、显微镜、酒精、二甲苯、苏木精、伊红、氨水、盐酸、蒸馏水、石蜡等。（二）技术路线:不同成长阶段香鱼的样品提取石蜡包埋，切片，染色分析各阶段结构组成的特点和不同数据图片整理，论文撰写查阅资料实验器材准备光镜下观察拍照细胞形状与排列组织构造与组成四、研究的总体安排与进度：2010年1月—2010年4月：1、实验前的准备工作：查找资料，写开题报告和论文综述； 2、仪器、药品的准备和各种实验材料的准备。2010年5月—2010年12月：1、不同成长阶段的香鱼脂肪腔道的结构与组成成分实验研究。2、根据所得的实验数据进行数据处理与分析。3、翻译外文文献。2011年1月—2011年4月：1、补充相关数据，整理试验结果；2、撰写论文，论文答辩。五、主要参考文献：[1]李明云.香鱼健康养殖实用新技术[J].海洋出版社,2009(1):96-99.[2]刘招坤.饵料系列对香鱼(PlecoglossusaltivelisTemmincketSchlegel)人工育苗成活率、畸形率和白化率的影响[J].现代渔业信息,2008,23(7):22-25.[3]王凤昀.香鱼的生物学特性及养殖技术[J].河北渔业,2000(2):13-14.[4]韩妍妍,王维娜,王安利.香鱼生物学特性及人工繁殖技术[J].水产养殖,2002(1):19-21.[5]徐鹏飞.阵阵清香扑面来——漫话香鱼[J].海洋世界第二期,2004(2):47-48.[6]庄平,宋超,章龙珍.长江口河蚬营养成分的分析与评价[J].ActaNutrimentaSinica,2009,31(3):304-306.[7]徐鹏飞.香鱼的生物学特征及其养殖技木探讨[J].现代渔业信息,2004,19(6):14-16.[8]YasuoK.GrowthrelatedtobehaviourofayuPlecoglossusaltivelis,rearedunderlowdensity[J].Res.Popul.Ecol,1963:65-73.[9]杨锦昌.养殖前景诱人的小型珍稀经济鱼类——香鱼[J].农村百事通,2003(18):36.[10]谢起浪,陈少波,单乐州,等.我国香鱼的研究概况与发展方向[J].科学养鱼,2002(9):3-4.[11]唐作鹏,关嘉勉.香鱼及其养殖[J].齐鲁渔业,1999,16(6):6-7.[12]李贺鹏,刘存岐.香鱼疾病研究进展[J].科学养鱼,2003(1):41-42.[13]单晓鸾,姜守轩.香鱼养殖常见疾病与防治[J].中国水产,2006(1):53-54.[14]陈百尧,唐兴本,伏光辉.内陆水库网箱养殖香鱼出血病的防治研究[J].江西水产科技,2007(1):28-29.[15]李先明,李治勋,刘熹.香鱼的人工养殖及饲料投喂技术[J].河南水产,2006(2):9-10.[16]朱艺峰,陈国年.香鱼幼鱼阶段的配合饲料设计[J].宁波大学学报,1999,12(3):49-53.[17] 陈少波,邵鑫斌,邹颖颖,等.溪流拦网放养和人工养殖香鱼营养成分比较研究[J].科技通报,2006,22(5):651-654.[18]颉志刚,牛翠娟,鲍蕾.香鱼的营养需要[J].中国饲料,2007(3):35-38.[19]叶启旺.我国香鱼的养殖研究现状与开发前景探讨[J].淡水渔业,2003,33(6):61-63.[20]李明云,竺俊全.淡水鱼之王——香鱼的养殖技术[J].中国动物保健,2000(8):33-35.[21]张涛.香鱼养殖产业的发展与市场走向[J].农村实用技术,2008(8):17.[22]谢起浪,陈少波,单乐州,等.飞云江香鱼资源的调查与分析[J].东海海洋,2003,21(1):45-54.[23]ReikoN,NobuakiO,HidekiU.Effectsofcaloricrestrictiononpost-spawningdeathofayu[J].ExperimentalGerontology,2005:556–561[24]蒙兆年.制作石蜡组织切片取材注意事项浅谈[J.卫生职业教育,2006,24(23):119.[25]涂永锋,宋代军.鱼类肠道组织结构及其功能适应性[J].江西饲料,2004(4):16-18. 毕业论文文献综述水产养殖学香鱼的研究概述摘要：香鱼，主要分布在日本、朝鲜、中国等地，属于人工养殖的优良品种，是一种非常名贵的鱼类。香鱼因其背脊上生有一条满是香脂的腔道，能散发出浓郁的芳香而得名。目前国内外关于这条脂肪腔道的研究较少，本文主要介绍香鱼的生物学特征、营养成分及其分析，发展前景等问题，由于香鱼是一种很有开发前景的鱼类，以后研究香鱼的脂肪腔道可能会成为一个热点。关键词：香鱼；脂肪腔道；生物学特征；营养成分分析香鱼(Plecoglossusaltivelis)，其学名是由于有褶膜状的舌(Plecoglossus)和高大的背鳍（altivelis)而来的[1]，俗称有油香鱼、海胎鱼等[2]，体型细长而侧扁，侧面绿色，背缘黑色[3]，其余白色，头小而吻尖[4]，除头部外全身被细小的圆鳞，各鳍都没有硬棘，背鳍后方有一个小脂鳍，上方有黄斑，尾部分叉。香鱼是一种很名贵的鱼类，由于自然资源的日益减少，其市场价格昂贵，目前鲜活鱼价格在60～80元/kg，每亩的净利在4万元上下，比普通家鱼约高10倍[5]。香鱼也是一种很有开发前景的鱼类，它适应能力较强，味道好，营养价值高，饲料来源方便，适宜于水库、湖泊、池塘等许多水体中养殖。由于它散发出浓郁的芳香是因其背脊上的一条满是香脂的腔道，所以开展对香鱼脂肪腔道的研究，对今后顺利开展改善养殖香鱼的味道以及品种改良等工作具有诱人的发展前景和经济价值。1生物学特征1.1洄游习性每年的春天，在海里越冬的仅2-3cm的幼鱼便进人河口上溯至饵料丰富的地方。幼鱼在江河中生长发育，随着性腺的发育，又向江河下游洄游，在秋天产卵[6]，并随着温度的降低和仔鱼的日益生长而使得当年孵出的幼鱼入海越冬。1.2食性作为滤食性鱼类的香鱼主要以浮游生物为食，食性杂，但夜间不摄食，在自然条件下，鱼苗主要摄食浮游动物和贝类幼体，而长大后以刮食河底石砾上的藻类，如硅藻、蓝藻及绿藻等为食，如浙江省宁海凫溪香鱼[7]。1.3生长与繁殖香鱼是一年生的鱼类，很多因素能影响它的生长[8]，秋天产卵后大部分亲鱼便死亡，故又称“年鱼”，生殖季节的雄鱼臀鳍为橙黄色，“追星”出现于背部和各鳍上[9] ，产卵场多在河流中，且下游要有石砾的浅滩，水色清澈，水流湍急[10]，水温从14℃至22℃，高纬度比低纬度地区产卵期更早，一般来说，绝对怀卵量为1—10万粒，相对怀卵量为600—700粒/g[11]。2疾病防治研究有关香鱼病害报道，台湾较大陆更为详细。蒋先冲等(1999)报道了宜兰地区养殖香鱼的病害及其发生诱因[10]。大陆方面，2003年有文章《香鱼疾病研究进展》，关注香鱼的疾病并总结出5种疾病[12]。单晓鸾，姜守轩于2006年发表于《中国水产》杂志上的，包括由鳗弧菌引起的弧菌病，链球菌病，点状气单胞菌引起的肠炎病，车轮虫病，鱼鲺病，水霉病和由白皮极毛杆菌引起的白皮病共7种关于养殖香鱼中常见的疾病的症状描述以及建议的治疗方法[13]。我国对于香鱼出血病也有相关研究并提出了预防和治疗的措施[14]。3脂肪腔道的主要营养成分3.1蛋白质和氨基酸蛋白质不仅是香鱼参与新陈代谢和免疫调节的各种酶和免疫蛋白的基础，也是核心的营养素，香鱼对蛋白质要求相对较高[15]，如背肌的主要营养成分含量中有粗蛋白75.4%[16]，可见香鱼的脂肪腔道等组织中蛋白质也是其主要的成分。而氨基酸是构成蛋白质的基本单位，包括必需氨基酸和非必需氨基酸，蛋白质的营养价值归根到底是氨基酸，特别是必需氨基酸的营养价值[17]。3.2脂质包括脂肪、必需脂肪酸、磷脂、香味物质等。其中最特别的是这种香味物质，虽然目前对脂肪腔道内芳香物质成分的研究仅有少量报道，但大致了解到它可能是一些酯类，气味类似西瓜或黄瓜的香味，具有挥发性[18]。3.3维生素包括维生素C、维生素B12、生物素、维生素E等，维生素C可能与香鱼机体的免疫应激系统和生长繁殖有关系，维生素E能维持香鱼的正常免疫机能，故维生素是必不可少的。3.4碳水化合物包括无氮浸出物和粗纤维，而前者包括单糖、双糖和多糖，能提供能量，后者也有纤维素、果胶等，但鱼体不能利用它们。4经济价值香鱼被称为“淡水鱼之王”[19] ，具有很大的营养价值和药用价值，含多种人体必需的氨基酸，食用有利于身体健康，且味道很好，其肉质细嫩多油,清香无腥，倍受消费者欢迎。这几年，随着人们生活水平的不断提高,人们对香鱼的需求日益增加，不仅在国内，香鱼在国际市场上也是抢手货,深受日韩和东南亚诸国的喜爱。而我国沿海地区，如宁波，具有适宜于香鱼养殖的条件，可以沿河流水养殖、用于游钓业[20]、出口国外等，可以预见不久的将来，香鱼的养殖与研究会成为一大热点[21]，对于脂肪腔道的研究也将会有现实价值。5展望目前国内外对于香鱼的研究主要限于人工养殖、育苗、资源保护[22]以及如何控制和延长香鱼寿命[23]等方面，对于香鱼不同阶段脂肪腔道的研究涉及不多，研究工作缺乏有效的数据分析，但可以借鉴其他组织结构与成分的分析，运用石蜡切片法，即通过取材、固定、脱水、包埋、切片、烤片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等一系列过程[24]制作不同阶段的石蜡切片，而结构必定与功能存在某种适应性[25]。随着人们对香鱼价值的逐渐重视，这就需要更多关于香鱼各方面的研究来提供理论依据和技术支持，香鱼的研究工作势必不断会有新的进展。参考文献[1]李明云.香鱼健康养殖实用新技术[J].海洋出版社,2009(1):96-99.[2]刘招坤.饵料系列对香鱼(PlecoglossusaltivelisTemmincketSchlegel)人工育苗成活率、畸形率和白化率的影响[J].现代渔业信息,2008,23(7):22-25.[3]王凤昀.香鱼的生物学特性及养殖技术[J].河北渔业,2000(2):13-14.[4]韩妍妍,王维娜,王安利.香鱼生物学特性及人工繁殖技术[J].水产养殖,2002(1):19-21.[5]徐鹏飞.阵阵清香扑面来——漫话香鱼[J].海洋世界第二期,2004(2):47-48.[6]庄平,宋超,章龙珍.长江口河蚬营养成分的分析与评价[J].ActaNutrimentaSinica,2009,31(3):304-306.[7]徐鹏飞.香鱼的生物学特征及其养殖技木探讨[J].现代渔业信息,2004,19(6):14-16.[8]YasuoK.GrowthrelatedtobehaviourofayuPlecoglossusaltivelis,rearedunderlowdensity[J].Res.Popul.Ecol,1963:65-73.[9]杨锦昌.养殖前景诱人的小型珍稀经济鱼类——香鱼[J].农村百事通,2003(18):36.[10]谢起浪,陈少波,单乐州,等.我国香鱼的研究概况与发展方向[J].科学养鱼,2002(9):3-4.[11]唐作鹏,关嘉勉.香鱼及其养殖[J].齐鲁渔业,1999,16(6):6-7.[12]李贺鹏,刘存岐.香鱼疾病研究进展[J].科学养鱼,2003(1):41-42.[13]单晓鸾,姜守轩.香鱼养殖常见疾病与防治[J].中国水产,2006(1):53-54.[14]陈百尧,唐兴本,伏光辉.内陆水库网箱养殖香鱼出血病的防治研究[J].江西水产科技,2007(1):28-29. [15]李先明,李治勋,刘熹.香鱼的人工养殖及饲料投喂技术[J].河南水产,2006(2):9-10.[16]朱艺峰,陈国年.香鱼幼鱼阶段的配合饲料设计[J].宁波大学学报,1999,12(3):49-53.[17]陈少波,邵鑫斌,邹颖颖,等.溪流拦网放养和人工养殖香鱼营养成分比较研究[J].科技通报,2006,22(5):651-654.[18]颉志刚,牛翠娟,鲍蕾.香鱼的营养需要[J].中国饲料,2007(3):35-38.[19]叶启旺.我国香鱼的养殖研究现状与开发前景探讨[J].淡水渔业,2003,33(6):61-63.[20]李明云,竺俊全.淡水鱼之王——香鱼的养殖技术[J].中国动物保健,2000(8):33-35.[21]张涛.香鱼养殖产业的发展与市场走向[J].农村实用技术,2008(8):17.[22]谢起浪,陈少波,单乐州,等.飞云江香鱼资源的调查与分析[J].东海海洋,2003,21(1):45-54.[23]ReikoN,NobuakiO,HidekiU.Effectsofcaloricrestrictiononpost-spawningdeathofayu[J].ExperimentalGerontology,2005:556–561[24]蒙兆年.制作石蜡组织切片取材注意事项浅谈[J].卫生职业教育,2006,24(23):119.[25]涂永锋,宋代军.鱼类肠道组织结构及其功能适应性[J].江西饲料,2004(4):16-18. 本科毕业设计（20__届）香鱼幼鱼、成鱼各阶段脂肪腔道的组织结构观察目录 引言11材料与方法21.1材料21.2实验仪器与试剂21.3形态学观察31.3.1解剖31.3.2发育阶段的划分31.4组织学观察32结果42.1脂肪腔道形态学观察42.2脂肪腔道组织学观察62.2.1脂肪组织62.2.2130日龄幼鱼脂肪腔道62.2.3154日龄幼鱼脂肪腔道62.2.4185日龄幼鱼脂肪腔道62.2.5330日龄成鱼脂肪腔道62.2.6360日龄成鱼脂肪腔道63讨论63.1其他硬骨鱼类与香鱼的不同63.2不同时期香鱼脂肪腔道的比较74小结7致谢11参考文献11 摘要：香鱼属鲑形目，香鱼科，香鱼属，肉质鲜美无腥，被称为“淡水鱼之王”，具有很大的营养价值。由于它能散发出浓郁的芳香是因为它的背脊上长有一条满是香脂的腔道。所以开展对香鱼脂肪腔道的研究，对今后顺利开展改善养殖香鱼的味道以及品种改良等工作具有诱人的发展前景和经济价值。本实验通过制作普通石蜡切片的方法，分别观察香鱼幼鱼期和成鱼期各阶段的脂肪腔道，旨在丰富香鱼的生物学资料及为进一步研究香鱼脂肪腔道提供初步的理论依据。实验表明幼鱼期前期仅有未发育完全的脂肪腔道，腺体开始一分为二；幼鱼期后期脂肪腔道已经开始发育，腺体发育成上下两个腺体，之间有肌肉隔膜将腔道一分为二，并且在切片中已经可以观察到大量的脂肪空泡的出现，之后两腺体又融合为一个；成鱼期的腺体增大，脂肪细胞增多，其中还有微血管。关键词：香鱼；脂肪腔道；组织结构观察Abstract:Ayubelongssalmon-shapedorder,ayubranch,ayugenus,whosemeatfreshwithoutfishy,knownasthe"kingoffreshwaterfish",hasgreatnutritionalvalue.Itexudesthearomaonhisbackbecauseit"shavingacavityfilledwithbalsamic.Socarryoutthestudyofthefatcavityofayu,whichimprovesthetasteofsweetfishbreedingandgeneticimprovementandsoonwithattractivedevelopmentprospectsandeconomicvalueinthefuture.Inthisstudy,weobservethefatcavityofseveralstagesofjuvenileayuandadultayubythemethodofordinaryparaffinsectionstorichbiologicalinformationofayuandayufatforfurtherstudyprovidedinitialtheoreticalbasisofthecavity.Experimentsshowthatthereisonlyrudimentarycavityfatinearlyjuvenileperiod,theglandbegantosplitintotwo;thecavityoflatejuvenileayuhasalreadybegundevelopment,glandsdevelopintotheupperandlowerglands,musclesdividethecavityintotwosections,andhasbeenobservedinthebiopsytotheemergenceofalargenumberoffatvacuoles,thenthetwoglandsbeginintegration;inthecavityofadultayu,theglandenlarges,fatcellsincrease,whichalsoincludesmicrovascular.朗读显示对应的拉丁字符的拼音字典Keywords:Ayu;fatcavity;Organizationalstructure"sobservation 引言香鱼（Plecoglossusaltivelis)属鲑形目，香鱼科，香鱼属，其拉丁文学名是以香鱼具有的显著特征，即有褶膜状的舌（Plecoglossus）、高大的背鳍（altivelis）而来[1]，英文名Sweetfish、Ayu。辽东半岛俗称秋生鱼，日本俗称鲇鱼，还有年鱼、油香鱼等称号。它肉质鲜美,清香无腥，被称为“淡水鱼之王”[2]。香鱼体细长，头小而吻尖[3]，口大眼小，前端向下弯成钩形突起形成吻钩，下颌两侧前端各有一突起，突起之间呈凹形，口关闭时，吻钩与此凹陷正相吻合。身体呈青黄色，背缘苍黑，两侧及腹部为白色，除头部外，全身密被极细小圆鳞，侧线鳞138片，侧线完全平直，位于体侧中部。尾分叉，各鳍无硬棘，背鳍后有一小脂鳍，与臀鳍后端相对。有趣的是，在鱼香的背脊上生有一条满是香脂的腔道，因能散发出浓郁的芳香而被称为“香鱼”。香鱼具有很大的营养价值，含人体所需的多种氨基酸，再加上口味上佳，所以深受消费者欢迎,其经济价值很高。由于近年来江河水利设施增多、工业废水污染以及过度捕捞等原因,香鱼自然资源日趋减少，部分地区个别溪流已濒于绝迹，属于易危品种。但随着人们生活水平提高、旅游业发展及国外对香鱼的需求，开展香鱼育苗和增养殖技术的研究，已引起有关地方和部门的重视。所以香鱼具有很大的发展潜力，一些像宁波这样适宜香鱼养殖的地方，可以预见不久的将来，发展香鱼会成为一大热点。香鱼属于洄游性鱼类，喜栖息于与海相通的溪流之中，分布于我国黄海、渤海、东海等地沿海及台湾省入海的江河溪流中。国外分布于朝鲜半岛和日本的内陆河、溪流和水库。就香鱼分布的地理特征而言，这些地区多为丘陵山地，其中流注港、湾、江、河的山涧溪流，落差大，水质清澈，水流湍急，且多石砾浅滩。另外，香鱼为排他性非常强的占地性鱼类，香鱼又名鲇鱼，据说是因为此鱼具有“占领地盘”的本领野生的香鱼，所占地盘范围为一平方米左右，加上活动的范围为2-3平方米[4]。香鱼背脊上有一条脂肪腔道，在所有鱼类中为其特有的结构，可能是散发出类似黄瓜的清香味的源泉，为世界上所不多见。这种香气很可能是其“占地”的“秘密武器”。香鱼的食性和其它植物食性鱼类相似，在苗种阶段为动物食性，随着个体发育而转为植物食性兼杂食性。香鱼的幼鱼早期以吞食浮游动物为主,后期则转变为刮食底栖附着硅藻为主的植物性饵料。进入淡水后，习性转换，开始动植物食性混合，最后以70mm以上的植物为主，刮食岩石上的藻类，其中有硅藻门的舟形藻、直链藻、桥穹藻、双菱藻和绿藻门的水绵，同时也摄食昆虫类和浮游动物。据研究，江河中的这些硅藻类、绿藻类、蓝藻类中的类胡萝卜素转化为一种特殊的香气，这种香气从香鱼体内散发出来，并在其生活区域扩散，极可能引起其他鱼类生活不适，阻止它们进入，保护了自己的生活空间，表现排他性强的占地性生活特点。同时，这种香气也使得香鱼与其他鱼类不同，其肉味清香无腥，广受欢迎，是养殖的优良品种。这种香气具有挥发性，类似黄瓜或西瓜香[5]，其主要成分为2-反-6-顺-壬二烯醛（分子量138.21）和3-顺-己烯醇（分子量100.16），其化学式（图1）： 图12-反-6-顺-壬二烯醛（左）和3-顺-己烯醇（右）Fig.12-Anti-6-cis-nonadienalaldehyde(left)and3-cis-hexenol(right)我国目前为止研究较多的是关于香鱼的实用性生产技术。在人工繁殖的研究方面，台湾省开始最早，1954年就开展了香鱼人工孵化试验。在大陆有关这方面的研究以浙江省李明云等最为成功。1979年，浙江水产学院曹克驹、李明云获得了香鱼人工繁殖研究成功，李明云、周福荣、曹克驹（1983）在人工繁殖基础上，采用土池综合育苗法，于1980年和1982年分别培育出香鱼苗种1373尾和12518尾，这表明香鱼人工繁殖和苗种培育在中国已获成功[6]。在增养殖方面，1982年，李明云等对香鱼的食性及相关器官发育进行了研究[7]，同时曹克驹、李明云对海产香鱼幼鱼的生物学、采捕及运输进行了研究，这是我国大陆对香鱼最早的基础研究[8]。在人工增殖放流方面，近年来,由于酷捕滥捞、水利开发和环境污染等原因,我国香鱼资源日趋枯竭,人工增殖放流是恢复资源的措施之一。1979年,曹克驹等首先在浙江宁海开展人工繁殖获得成功。李明云等最早于1979-1983年在浙江宁海进行过香鱼放流试验,取得了较为显著的增殖效果；而后,又相继在浙江鬼溪、白溪、洋溪等溪流(1993年)和雁荡山石门潭等地(2001年)进行过增殖放流[9]。李斌顺、杨华等人也研究过香鱼的移植放流技术[10]。随着近年来香鱼养殖规模的扩大，养殖中常见的疾病研究也越来越受到重视。由于香鱼对水质的要求高，并且有占据“地盘”的特性，在人工设置的生态环境里难以适应，容易发生疾病。具体有弧菌病（主要由鳗弧菌引起）、链球菌病（主要由链球菌引起）、肠炎病（主要由点状气单胞菌引起）、车轮虫病（主要由车轮虫引起）、鱼鲺病（主要由鱼鲺引起）、水霉病（主要由水霉引起）、白皮病（主要由白皮极毛杆菌引起）[11]。李贺鹏等于2003年总结出5种香鱼的疾病，张可、万志于2003年也提到了香鱼六种疾病（红眼病、白皮病、水霉病、皮肤溃烂、寄生虫病、肝肾血病）的防治[12]。在人工养殖香鱼过程中，为预防病原体的感染，必须要注意种苗的来源，合理的放养密度，合理投饵等方面来增强香鱼的抗病力。总之，目前国内外的研究涉及香鱼脂肪腔道的不多， 具有创新性和开拓性，而要探索它的功能，了解它的结构是非常有必要的，根据其他关于组织结构观察的实验，本实验通过石蜡切片法观察腔道的结构，了解腺体、脂肪细胞、肌肉等的形状、排列以及构造，分析与功能存在某种适应性关系的结构，并通过提取不同生长发育阶段的幼鱼、成鱼的脂肪腔道来掌握随着香鱼的生长，其腔道结构的变化。本实验对香鱼脂肪腔道的研究旨在初步了解其脂肪腔道的基本形态以及结构特点，为进一步研究提供理论依据，并且丰富香鱼的生物学基础资料。总之，随着人们越来越重视对于香鱼的研究，这种实验更是具有重大的意义。1材料与方法1.1材料本实验所用的为不同时间获取的幼鱼期和成鱼期的香鱼，采自浙江宁海凫溪香鱼养殖场。幼鱼期香鱼都是在去年10月15日孵化的，根据日龄大小分为三批，第一批取自2月20日，日龄可算作130日；第二批取自3月15日，日龄为154日；第三批取自4月15日，日龄为185日。成鱼期香鱼分成两批，取自去年9月15日的为第一批，330日龄；取自去年10月15日的为第二批，360日龄。香鱼幼鱼期也称未成熟鱼，具有成鱼形状特征，鱼体内外结构逐步发育健全，但各部比例等尚与成体不完全相同，体色转黑至性发育成熟前属于幼鱼期，；成鱼期指性腺发育成熟时期。不同生长发育期在同一条件下生长，外观健康，无疾病。1.2实验仪器与试剂常用解剖器材(解剖刀、剪和尖头镊子等)、电子天平（上海伦捷机电仪表有限公司，FA系列）、直尺、切片机（浙江省金华市科迪仪器设备有限公司，型号KD—202）、显微镜（上海光学仪器厂提供的中恒显微镜）、照相机（佳能CanonIXUS85）、酒精、二甲苯、苏木精、伊红、石蜡等。1.3形态学观察1.3.1解剖本实验所用幼鱼期和成鱼期香鱼分别为60条和40条，其中130日龄幼鱼20条，154日龄幼鱼20条，185日龄幼鱼20条，330日龄成鱼20条，360日龄成鱼20条。将香鱼置于干毛巾中包裹，待其活力减弱，呼吸均匀时用电子天平测量鱼体的体重，用直尺测量鱼体的全长，接着分别记录并算出平均体重和平均全长，再将组织小心取出，置于滤纸上，用电子天平先称量另一张滤纸的重量，再称量滤纸和脂肪腔道的重量，再用直尺测量其长度，分别记录下来并计算平均质量和平均长度，最后得到香鱼脂肪腔道与鱼体质量百分比M%和长度百分比L%，不同生长时期分别计算，具体计算公式如下:鱼体平均体重=香鱼质量总和/香鱼条数；鱼体平均全长=香鱼全长总和/香鱼条数；脂肪腔道平均质量=脂肪腔道质量总和/香鱼条数；脂肪腔道平均全长=脂肪腔道长度总和/香鱼条数；M%=脂肪腔道平均质量/鱼体平均体重；L%=脂肪腔道平均全长/鱼体平均全长。解剖香鱼成鱼时，在解剖盘里将其背部的肌肉层、背鳍和脂鳍用解剖剪全部剪去，因为包裹脂肪腔道的背部肌肉层不厚，宜一层层刮，直至观察到其背部有一条凹槽，内部充满脂肪组织，与周围组织明显不同，这个凹槽就是脂肪腔道。成鱼期发育完整，脂肪腔道明显，而幼鱼期香鱼的鱼体较小，脂肪腔道有的非常小，不利于取样,对这些鱼，本实验将其背部的背鳍、脂鳍和胸腔肌肉剪去后，剩余鱼体部分进行切片处理。1.3.2发育阶段的划分鱼卵自受精起，新的生命乃告开始。在孵出之前，鱼胚为卵膜所包围，处于胚胎发育阶段。从仔鱼孵出起以至衰老的整个胚后阶段可划分为下列发育时期：仔鱼期。当鱼苗从卵膜孵出，开始在卵膜外发育，进入仔鱼期。此期鱼体具有卵黄囊、鳍膜等仔鱼器官，是由内源营养转变为外源营养的时期，包括两个分期：前仔鱼期。 从孵出到卵黄囊吸收完毕。此期鱼体依靠卵黄营养，不能主动摄食；后仔鱼期。自卵黄囊吸收完毕开始，发育至具有一定数量的鳍条为止。此期中虽已开始摄食，但内部和外部的形态结构中都存在仔鱼的特点，是主动营养的早期阶段。稚鱼期。为鱼体形态结构迅速发育的时期。自鳍的发育完毕起，至鳞被发育完成为止。此期中消化器官向成鱼的基本形态迅速发育，最后胃、肠、幽门盲囊等均达到各个种特有的形态和数量。通常是指孵出不超过一个月的鱼体。幼鱼期。从前期结束，到具有一定的斑纹色彩，外形和成鱼相似为止。鱼体内外结构逐步发育健全，但各部比例等尚与成体不完全相同。通常是指未达性成熟的当年鱼。未成熟期。从前期结束起，到性成熟为止。在此期中鱼体的形态结构与成熟鱼相同，仅性腺正处在发育中，尚未进行首次繁殖活动。成鱼期。自性成熟起，鱼体己具备生殖能力，在每年的一定季节进行生殖活动。不少种类具有第二性征。衰老期。进入此期的标志是性机能衰退，生殖力显著降低，长度生长极为缓慢。这是鱼类学中对鱼体胚后发育的分期，人们在对上述各期鱼体发育和生态特点进行研究的基础上，进一步划分成更细的时期或阶段，这在生产上和学术上都具有重要的意义。1.4组织学观察首先用Bouin试剂（配方为1g苦味酸放入75ml蒸馏水，再加40%甲醛25ml和冰乙酸5ml）固定24小时或更长时间，使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构，为制作组织切片做准备。再用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。包埋前应该将买来的新蜡熬几天，使得石蜡中的杂质挥发掉，最好是让石蜡颜色变深变红。之后可以脱水，脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分[13]，具体操作：70%酒精（30min）→80%酒精（60min）→90%酒精（60min）→95%酒精Ⅰ（45-60min）→95%酒精Ⅱ（30-60min）→100%酒精Ⅰ（30min）→100%酒精Ⅱ（20min）。再将组织块透明，以二甲苯替换出组织块中的酒精，脱水务必脱净，如果脱水不尽,时间再长透明效果也不会好的[14]。具体操作：100%酒精与二甲苯1：1（10-20min）→二甲苯Ⅰ（10-15min）→二甲苯Ⅱ（10-15min）→二甲苯Ⅲ（10-15min）。再将已透明的组织块浸蜡和包埋。具体操作：石蜡与二甲苯1：1（20-30min）→石蜡Ⅰ（45-60min）→石蜡Ⅱ（45-60min）→石蜡Ⅲ（45-60min），最后将组织块倒入事先准备好的小纸盒，用石蜡包埋。第二天上午切片，下午染色。将包埋好的蜡块置于切片机上连续切片，厚度为6-7um，将薄片放到温水中烫平，再贴到载玻片上，放50℃恒温箱中2-3小时以烘干。染色时用苏木精—伊红(HE)染色，苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。将组织块放入一系列试剂瓶中染色。染色过程为：二甲苯Ⅰ（7min)→二甲苯Ⅱ（7min)→100%酒精与二甲苯1：1（5min）→100%酒精（2min）→95%酒精（2min）→90%酒精（2min）→80%酒精（2min）→70%酒精（2min）→蒸馏水（2min）→苏木精染色（15-25min）→自来水冲洗（10-25 min）→盐酸（用70%酒精配成1%的盐酸液）（10s）→蒸馏水（1min）→氨水返蓝（1-2min）→自来水（5-10min）→70%酒精（2min）→80%酒精（2min）→90%酒精（2min）→0.5%伊红溶液（10s）→95%酒精Ⅰ（1min）→95%酒精Ⅱ（1min）→100%酒精Ⅰ（1min）→100%酒精Ⅱ（1min）→100%酒精与二甲苯1：1（2min）→二甲苯Ⅰ（2min）→二甲苯Ⅱ（2min）。将已透明的切片滴上中性树胶，盖上盖玻片封固，注明制作日期等信息加以区分，最后制成切片标本。接下来是在光学显微镜下观察，奥林巴斯Olympus荧光显微镜BX60拍照，由日本奥林巴斯株式会社及奥林巴斯(中国)投资有限公司制造。切片通常先用低倍镜进行扫描,以了解要观察结构的全貌、框架、切片是否完整、有无污染等[15]。用低倍镜观察到后，再用高倍镜进一步观察结构的细致组成。2结果2.1脂肪腔道形态学观察130日龄幼鱼鱼体细长，平均全长4.96cm，平均体重0.78g，脂肪腔道刚开始发育。154日龄幼鱼鱼体平均全长6.75cm，平均体重1.97g，其已经开始发育，185日龄幼鱼鱼体平均全长8.82cm，平均体重4.89g，脂肪腔道已经非常明显，解剖后可以用肉眼观察到其背部有一条充满白色物质的腔道。用镊子和解剖刀将其小心取出，观察其整体形态与鱼体背部形态相似，形状呈长梭形，头尾两部分较尖，中部靠前较厚。香鱼的生长非常迅速，330日龄成鱼的平均质量为27.16g，平均全长为15.52cm，而360日龄成鱼的平均质量为36.21g，平均全长为16.29cm，脂肪腔道也更加明显，内充物也更加饱满，开始于头部上枕骨，到脂鳍，周围被鱼体的肌肉包裹着（见图版Ⅰ）。将其小心取出，形状是呈长梭形，头尾两部分较尖，中部靠前较厚，整体形态与鱼体背部形态相似。 图版Ⅰ香鱼脂肪腔道PlIthecavityfatofayu表1香鱼各个时期质量和长度以及脂肪腔道的比较Tab.1Theweightandlengthandfatcavitycomparisonofayuatdifferentdevelopmentstages时期/指标日龄（日）平均体重g平均全长cm脂肪腔道平均质量g脂肪腔道平均长度cmM%L%第一批幼鱼1300.784.960.021.012.5620.36第二批幼鱼1541.976.750.061.913.0528.30第三批幼鱼1854.898.820.154.433.0750.23第一批成鱼33027.1615.521.518.425.5654.25第二批成鱼36036.2116.291.649.164.5356.232.2脂肪腔道组织学观察2.2.1脂肪组织脂肪组织主要由大量群集的脂肪细胞构成，聚集成团的脂肪细胞由薄层疏松结缔组织分隔成小叶。在香鱼幼鱼期、成鱼期背部腔道的切片里发现大量的脂肪细胞，由这些脂肪细胞堆积，组成的结缔组织就是脂肪组织。一般脂肪组织是不分裂的，它由成脂肪细胞产生，新的成脂肪细胞来源于未分化的间充质细胞。在细胞质中积累脂肪，而分化为脂肪细胞。当脂肪细胞中的脂肪被消耗以后，它又可以回复到成脂肪细胞阶段。鱼类的脂类物质主要脂肪细胞质内充满脂肪滴，胞质位于细胞边缘成一薄层，核亦被挤到细胞的边缘，压成扁形。本实验用的普通制片法—— H.E染色法，处理过的脂肪组织，因脂肪被酒精及二甲苯溶解，细胞呈空泡状，并因挤压而呈椭圆或多角形，又因许多细胞聚集在一起，所以形成蜂窝状。因为这条腔道里主要成分是脂肪组织，将此腔道称为脂肪腔道。2.2.2130日龄幼鱼脂肪腔道130日龄幼鱼体细长，剪去其背鳍和脂鳍并把背部皮肤除去，观察到的脂肪腔道组织块很小。切片观察时，为了更好的说明这一时期的脂肪腔道，可以与稚鱼期的进行比较。我们可以根据以前的研究，香鱼稚鱼期背部切片可以明显看到香鱼的骨骼，包括椎体，背肋骨，髓弓，髓脊，还有包含在髓弓中的脊髓。从鱼背部到椎体，脂肪腔道位于皮肤下肌肉和髓脊上方之间，其中只含有一个特殊结构，有隔膜包被，呈狭长型，该结构被染成紫蓝色。而130日龄幼鱼背部切片可以看到其中的狭长型特殊结构（以后称为腺体）开始分化,可以略微看出腺体中间出现隔膜将其分开，周围出现了脂肪组织，腔道整体呈倒三角形（见图版Ⅱ）。2.2.3154日龄幼鱼脂肪腔道154日龄幼鱼的香鱼脂肪腔道的发育呈一个动态过程，我们可以明显的观察到这一批鱼中较小的个体的腺体一分为二，形成上腺体和下腺体，两结构之间有肌肉连接形成隔膜；稍大的鱼体上下两腺体又聚拢起来，两结构之间的肌肉隔膜开始消失；到了这批鱼中最大的个体时，两腺体已经非常接近了，并开始出现脂肪组织，呈“U”形包围着背肌（见图版Ⅲ）。2.2.4185日龄幼鱼脂肪腔道185日龄幼鱼的香鱼脂肪腔道发育得更加完整，切片中有大量的脂肪空泡，只有一个腺体，周围被肌肉所包围，已经发育形成接近于成鱼的结构（见图版Ⅲ）。2.2.5330日龄成鱼脂肪腔道发育至成鱼期时腺体仍然存在，成鱼I期香鱼脂肪腔道切片中观察到的腺体被染成红色的一个椭圆形，里面充满着被染成蓝紫色颗粒，它被肌肉包被，四周有大量脂肪组织（图版V）。2.2.6360日龄成鱼脂肪腔道360日龄成鱼脂肪腔道切片可以观察到大量脂肪细胞，其中包括有未分化的间充质细胞，成脂肪细胞。除了脂肪细胞还有微血管。除此之外，还可以观察到一个呈椭圆形，被表被染成红色，内充物是被染成紫蓝色颗粒的结构。且与330日龄成鱼相比，内充物更加多，说明其已发育完全（图版V）。3讨论3.1其他硬骨鱼类与香鱼的不同香鱼由于脂肪腔道的存在，脂肪含量比其他淡水鱼类更加高，淡水鱼类脂肪含量较低，一般为1％～3％，主要分布在皮下和内脏周围，脂肪含量在6%以上的都可认为是高脂鱼，野生香鱼可食部分每100g含5.5g，养殖香鱼的脂肪含量比野生的稍高，100g含10.4g（叶岩豹，2004），甚至比其他硬骨海产鱼类（金线鱼7.5%，皮氏叫姑鱼8.5%）的脂肪含量高[16] ，因此香鱼是高脂鱼。香鱼各个发育期的背部从上枕骨到脂鳍位置，有一条脂肪腔道，香鱼的幼鱼期和成鱼期，其位置基本一致，不同的是根据不同发育期鱼体的大小和长短有区别，成鱼期的脂肪腔道比幼鱼期的更为饱满。成鱼期的腔道里充满脂肪，腔道的周围有肌肉。这种特殊的形态又是与其他硬骨鱼类的背部形态有所区别的，一般硬骨鱼类的背肌内无腔道。另外，香鱼含有的丰富油脂中二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）的含量也比其他淡水鱼类高出许多，1977年丹麦科学家Derberg发现EPA和DHA具有防治心血管的功能，并且还可抗癌、抗炎、增强免疫功能等。随着研究的深入，发现EPA还具有降低血液中的中性脂肪，防治动脉硬化的功能，DHA对大脑的发育、智力和记忆力的增长防老化等都有促进作用。因此香鱼脂肪腔道中的EPA和DHA可开发利用于保健产品和日常化妆品。3.2不同时期香鱼脂肪腔道的比较目前，关于香鱼的研究较多的是其增养殖技术与育苗技术，近年来随着香鱼养殖业的发展，香鱼养殖病害的防治工作也受到广大科学工作者的关注，但是对其生长发育方面的相关研究却较少，并且都是比较基础的探讨，2003年姬广闻对盐度对香鱼仔鱼生长和成活率的影响进行了研究[17]。2007年田照辉等人观察了水泥池养殖香鱼性腺的发育，对养殖香鱼雌、雄鱼性腺发育状况和香鱼的精巢结构以及养殖香鱼卵巢发育与洄游型、陆封型香鱼进行了比较与观察研究[18]，日本的YasuoKODAMA早在1963年就探讨各种因素对香鱼生长与行为的影响[19]，2005年日本的ReikoNagasaka等人对香鱼产卵后死亡的热量限制（CR）的影响进行研究[20]，但是关于香鱼脂肪腔道的研究比较少。本实验观察到不同时期香鱼脂肪腔道都可以观察到一个非常特殊的结构，该结构由隔膜包被，内充满嗜碱性颗粒，我认为这些颗粒极可能是细胞核，里面有腺细胞，这个结构可能是腺体。130日龄幼鱼腺体开始分离为上下两个腺体，里面开始充满脂肪，脂肪腔道空间大，呈倒三角形，发育至185日龄已融合为一个腺体，其结果与成鱼非常相似了。发育至成鱼期时腺体仍然存在，呈椭圆形，腔道内脂肪细胞增大增多，并且可以明显的看到未分化的间质细胞和成脂肪细胞，成鱼时期脂肪组织增多并且出现明显的微血管，血管有供给营养，维持脂肪腔道的作用。从中可以看出，整个发育时期脂肪腔道由小变大，脂肪细胞增大增多，而且成鱼期可以观察到血管，腺体从稚鱼时期的一个狭长型发育成两个，最终又融合为一个椭圆形的较大的腺体，腺体的内充物也随着发育逐渐增多。4小结目前关于香气的研究只是处于起步阶段，仅知道其成分，关于其产生机制目前尚不明了。本实验通过香鱼脂肪腔道的结构的观察，发现一个由隔膜包被，内含嗜碱性颗粒的结构，该结构含有大量被HE染色成蓝紫色的颗粒，这些颗粒是腺细胞核，认为香气极可能就由其中产生。同时本实验观察到随着发育的进程，腺体也随之发生的动态变化。但我们需要更多的实验来深入研究这些结论的正确与否，对其中如何产生大量脂肪细胞以及香气的形成机制等方面也同样需要更多的研究工作来进一步探讨。 图版Ⅱ稚鱼和130日龄幼鱼脂肪腔道切片PlⅡPhotomicrographsofcavityfatinthelarvaland130day-oldjuvenileayuA：稚鱼切片图，HE20×；脂肪腔道狭长形,仅含有一个腺体，腺体染成蓝紫色，位于皮肤下及髓脊之间，周围包被着肌肉A：Photomicrographsoflarvalayu,HE20×;Thealiphatictractisshapedandthereisagland,whichisstainedblue-violet,islocatedundertheskinandbetweenthespinalmarrow,themusclesaroundthecoatedB：130日龄幼鱼切片图，HE20×；脂肪腔道中的腺体开始分化，周围出现脂肪组织B：Photomicrographsof130day-oldjuvenileayu,HE20×;fatglandsinthecavitybegantodifferentiate,thesurroundingfattissueappears（1-开始发育的腺体；2-上腺体；3-下腺体；4-两腺体开始分离；5-脂肪组织；6-肌肉；7-髓脊；8-脊髓；9-髓弓） 图版Ⅲ154日龄幼鱼（A，B，C）和185日龄幼鱼（D）脂肪腔道切片（HE10×）PlⅢPhotomicrographsofaliphatictractinthe154day-oldand185day-oldjuvenileayu（HE10×）A：有上下两个腺体，中间被肌肉隔膜分隔；B：两腺体开始靠拢；C：腺体靠拢；D：肌肉包被的腺体A:twoglandsinthemiddleseparatedbydiaphragmmuscle;B:thetwoglandsbeginclosing;C:glandsclose;D:theglandiscoatedbymuscle（1-上腺体；2-下腺体；3-肌肉隔膜；4-髓脊；5-背肌；6-脂肪组织；7-融合后的腺体） 图版V成鱼期香鱼腔道切片（HE20×）PlⅣPhotomicrographsofaliphatictractintheadultayu（HE20×）A，B，C为330日龄成鱼；D为360日龄成鱼（1-腺体；2-微血管；3-肌肉；4-脂肪组织） 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