3730测序仪操作流程 8页

3730测序仪操作流程打开电脑，打开机器，待建立连接后，双击桌面图标“DC”。 待“Service Console”四个指示灯，全部变红后，自动显示操作窗口。 1预备阶段 换胶、换Runing buffer、Water。 胶从四度冰箱中取出，添加至原来的胶瓶中。少量多次，避免浪费。 Buffer 一般三天换一次，最长一周一次。主要是阳极杯 和buffer槽（阴极）。 Water、Waste槽中均换新鲜纯净水。 关闭舱门。 2 样品准备 按照BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit说明书。 3 操作 Module mangager 点击进入后，根据毛细管长度，胶的类型及应用适当填写，如“3730_Seq_36cm_Pop7”。 Type选择 regular，Template选择StdSeq36_Pop7，也可略有改动。点击OK，保存。 Protocal manager 点击进入，Instrument protocal点击的New，键入Name，命名规则如上一步所示。 Run moduler选择在Module manager 所建立的 Type选择Regular dye set选择bigdye3.1, 点击OK 在analysis Protocal中点击New，键入名字，其他保持默认值，也可根据需要略微改动。 点击Plate manger>new>出现一个对话框，Application选择sequence analysis,Plate type 选择96孔板，Sealing 选择speta，其他根据实际情况填写，点击OK进入下一步。 键入Sample名字，选择Results group 地址 ，Instrument protocal，analysis Protocal均选择在上一步中建立的。选中RG 、IP、AP在Edit中选择Fill down¬(96/48)点击OK 。 在Run schduler选中刚刚建立的Plate。 Search all通过Search 或者Find all进行寻找，找到后，选中，单击Add。 此时所编写的板子会出现在Input Stack中，选中点击菜单栏中的绿色箭头。 数据分析：在result group中寻找结果，并用sequence analysis软件进行分析。 关机：关掉软件窗口，待service console中四个指示灯全部变红后，关掉控制台。整个过程中控制台，一直开着，不要关闭。 关闭机器及电脑的电源。3730DNA分析系统的技术特点：·双光束双侧激光激发，后置超薄CCD·全自动上样系统·内置条形码阅读器·自动碱基识别与质量评分软件·最新推出POP-7液体分离胶·良好的温控装置提供了更大的温控范围（18~70℃）3730DNA分析系统用于DNA测序的主要优点：·电泳温度可达70℃，有助于去除二级结构的影响·良好温控装置保证片段分析准确性及重现性好 ·新的液体分离胶(POP~7TMPolymer)使通常读序长度即可达800bp·新型碱基识别与质量评分软件，提高测序准确性·毛细管内荧光检测，灵敏度高·双光束双侧激光激发，荧光信号强度高度均一·高灵敏度提高了测序模板DNA的浓度范围·ABI3730XL测序仪为满足测序用户对大规模测序节省时间、降低成本和操作复杂性的要求，AppliedBiosystems推出新的3730XL系列DNA分析仪。3730xl采用最新的光路系统设计，结合更优化的试剂组合和全自动化操作流程，在提高产率、提高数据质量的同时最大限度的降低试剂的消耗。应用3730测序平台分离胶的用量可以节省30倍，反应缓冲液节省200倍，荧光染料只需要原来浓度的一半，3730xl由于致力于改进影响测序质量的最关键因素，所以能够提供给您更快更准测序成本更低的操作平台。· ABI全自动DNA测序仪（遗传分析仪）的详细介绍·3730xl的主要特点：·-      双光束双侧激光激发，光栅分光装置和后置超薄CCD检测成像系统-       内置一体化自动进样器及样品孔打孔装置-       内置样品板条形码自动识别-       100次（9600个样品）运行试剂一次上机-       自动碱基识别与质量评分判定-       最新推出POP-7液体分离胶，动态内镀毛细管壁-       电泳温度范围18-70C3730xl主要好处-        高质量测序结果•        电泳温度70C，去除二级结构的影响•        新型分离胶，可测1100碱基测序长度。•        新型碱基识别与质量评分软件，提高测序准确性-        最高灵敏度的光路系统•        毛细管内荧光检测•        后置超薄CCD检测系统•        双光束双侧激光激发，荧光信号强度高度均一•        高灵敏度提高检测DNA的浓度范围-        超低成本测序平台•        高灵敏度减少DNA和测序试剂的使用量。•        胶使用量比3700少30倍•        高成功率及长读结果减少非电泳相关的整体项目成本•        更高的自动化减少劳力成本及人为失误的成本        高通量减少仪器折旧，人力及维护的平均成本3730xl产率分析     测序模式毛细管电泳时间读序长度每天产率     短片段测序36cm36min500bp1,728,000bp     快速测序36cm60min700bp1,440,000bp     标准测序36cm90min800bp1,113,000bp     长片段测序50cm120min1100bp1,002,000bp  规格指标:激光：氩离子激光光源，激发波长为488nm和514.5nm电泳电压：高达20kV运行温度：18℃到70℃计算机要求硬件：PentiumⅣ处理器操作系统：Windows®2000内存： 1GB硬盘： 72GB硬盘显示器：17寸彩色显示器 运行环境室温：18－30℃湿度：20％－80％主电源电压：200－220伏或230－240伏+/-10％　　50/60HZ+/-10%|电流：最大15安培最大电源功率：2000瓦仪器尺寸宽度：100cm深度：73cm高度：89cm重量：180kg双脱氧链终止法原理    双脱氧链终止法又称为Sanger法，其原理是DNA模板在DNA聚合酶、引物、四种脱氧核苷酸三磷酸（dNTP）存在下进行复制时，在四管反应体系中分别按一定的比例引入四种双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3’-OH基团，当ddNTP掺入链的末端时，该链就会停止延伸。如此每管反应体系中就产生了一系列长度不等的以ddNTP为3’端的DNA片段。反应终止后，分4个泳道进行凝胶电泳以分离长短不一的DNA片段，相邻的片段长度相差一个碱基。经放射自显影后，根据片段3’端的双脱氧核苷酸，便可获得合成片段的碱基排列顺序。  ABI3730XL测序仪技术原理    ABI3730XL自动测序仪是基于毛细管电泳和荧光标记技术的DNA测序仪。3730XL测序仪拥有96道毛细管，并用荧光标记代替了Sanger法中的同位素标记，从而大大提高了DNA测序的速度和准确性。4种双脱氧核苷酸（ddNTP）的碱基分别用不同的荧光进行标记，在通过毛细管时，不同长度的DNA片段上的4种荧光基团被激光激发，发出不同颜色的荧光，被CCD检测系统识别，并直接翻译成DNA序列。 1、一次电泳能测定96个样品，每天的测序产率达1152个样品；2、单反应测序读长达1000bp以上，精确读长高达800bp；3、高准确率，测序质量的金标准；4、自动灌胶、上样、电泳分离、检测及数据分析，全自动化流程，运行24h无需人工干预；5、自动碱基识别、基因分型与质量评分判定；6、高灵敏度减少DNA和测序试剂的使用量；7、更高的自动化，减少劳动力成本及人为失误的成本。技术应用 1. 菌液、质粒、PCR产物测序2.Fosmid/Cosmid/BAC双末端测序3.大片段鸟枪法测序4.EST测序和分析5.步移测序6.SNP发现和重测序7.STR分型 用3730测序仪测序时为什么在没有样品的板孔里要加甲酰胺?算是溶剂把,加强溶解效果,甲酰胺是强变性剂,可以打断碱基间的氢键,阻止测序PCR产物形成2级结构.2级结构的形成将会通过产物的形态,来改变其迁移速度,使最终的结果出现误差第一，容易操作，大部分地方都是用排枪的吧？第二，3730xl的毛细管吸取样品的时候，使用的方法是加高压电（8.5kv）来在短时间内让大量DNA产物进入毛细管。没有加入甲酰胺或者其他溶剂时，容易出现静电或烧坏毛细管。分子式：CH3NO分子量：45.04 毒性：中毒3730测序仪怎么进行日常维护?1.换胶.2、定期更换BUFFER.3、废液和水定期更换.4、泵的清洗.北京BUNNY工作组   ABI3730xl型测序仪日常维护标准操作规程(SOP) 每天 维护工作 频率 确认溶液槽中有足够的缓冲液和水 每次实验前 确认样品板被正确组装 重要！固定器和橡胶垫的孔必须对齐，否则会损坏毛细管 每次实验前 确认样品板牢靠平整地固定在托架上 重要！永远不要使用弯曲的样品板 每次实验前 检查阳极缓冲液杯中缓冲液的量，确认其溢液孔畅通且面朝仪器前方 每次实验前 更换溶液槽中的Buffer和水，确认槽的外围是干燥的 每48小时或每20个runs 更换water和waste溶液槽中的水，确认槽的外围是干燥的 每天或每20个runs 检查泵上下block、连接管、胶管和各通道中是否有气泡，使用Bubble Remove向导除去气泡 每天或每次实验前 检查毛细管的取样末端以确认其未损坏 每天或每次实验前 检查胶瓶中的胶以确认有足够的胶完成实验 每天或每次实验前 检查泵胶块和下胶块以确认其未松动 每天 清洁仪器表面、实验台表面 每天 检查毛细管旋钮，连接管螺帽和阀门以防止泄露 每天  每星期 维护工作 频率 使用Change Polymer向导换胶 每星期或需要时 检查旧毛细管的储存条件 每星期 使用注射器抽取20ml去离子水，清洗泵头的密封圈 每星期 使用去离子水浸泡胶垫，用自来水冲洗后再用去离子水洗一遍 每星期或需要时  每月 维护工作 频率 运行Water Wash向导，不管有无气泡，冲洗毛细管端口 每月或需要时 检查旧毛细管的储存条件 每月或需要时  每年   需要时 维护工作 频率 清洁漏液托盘 需要时 更换毛细管 需要时 去除毛细管末端已经干掉的胶，使用双蒸水湿润的无纤维布 需要时 使用无屑的棉球沾上无水乙醇轻轻擦拭毛细管检查窗口两端 每季度或空间、光谱校正时